Micronucleus in exfoliated buccal cells of crack users: systematic review and meta-analysis / Micronúcleos en células bucales exfoliadas en consumidores de crack: una revisión sistemática y meta-análisis

Abstract This research aimed to conduct a systematic review and metanalysis to compare the frequency of cell damage in crack users and nonusers, through Micronucleous (MN) test in buccal mucosa cells. A comprehensive search was carried out on MEDLINE via PubMeb, Web of Science, LILACS and the grey literature without restrictions. It was included case-control studies that report the frequency of micronuclei in the oral mucosa of adult crack users and nonusers. A review protocol was registered with PROSPERO (CRD42018115672), and conducted in accordance with the PRISMA guidelines for the report of this systematic review. Furthermore, study quality was evaluated using an adapted Newcastle-Ottawa Scale for cross-sectional studies.The original search yielded 27 references, after eligibility criteriaonly five articles were included. The number of micronuclei was higher in crack users compared to nonusers. Also, secondary outcomes: binucleated cells, nuclear buds, pyknosis, karyorrhexis and karyolysis had higher prevalence in crack users.Crack use is associated with genotoxic and mutagenic effects because there is a higher frequency of micronuclei in exfoliated cells of crack users. In addition, MN test proved to be a goodbiomarker to assess the mutagenic impact of crack use in oral epithelium.

Resumen Esta investigación tuvo como objetivo realizar una revisión sistemática y un meta-análisis para comparar la frecuencia de daño celular en usuarios de crack y sin crack, a través de la prueba de micronúcleos (MN) en células de la mucosa bucal. Se realizó una búsqueda exhaustiva en MEDLINE a través de PubMeb, Web of Science, LILACS y la literatura gris sin restricciones. Se incluyeron estudios de casos y controles que informaron la frecuencia de micronúcleos en la mucosa oral de usuarios adultos de crack y sin crack. Se registró un protocolo de revisión con PROSPERO (CRD42018115672), y se realizó de acuerdo con las pautas de PRISMA para el informe de esta revisión sistemática. Además, la calidad del estudio se evaluó mediante una escala Newcastle-Ottawa adaptada para estudios transversales. La búsqueda original arrojó 27 referencias, después de los criterios de elegibilidad se incluyeron un total de cinco artículos. El número de micronúcleos fue mayor en los usuarios de crack en compa ración con los usuarios sin crack. Además, los resultados secundarios de células binucleadas, yemas nucleares, picnosis, cario- rrexis y cariólisis tuvieron una mayor prevalencia en los usuarios de crack. El uso de crack se asocia con efectos genotóxicos y mutagénicos porque hay una mayor frecuencia de micronúcleos en las células exfoliadas de los usuarios de crack. Además, la prueba de MN demostró ser un buen biomarcador para evaluar el impacto mutagénico del uso de crack en el epitelio oral.

Biomarkers of susceptibility and effect in car painters exposed to organic solvents / Biomarcadores de susceptibilidad y efecto en pintores de carros expuestos a solventes orgánicos

Abstract Introduction: Car painters are routinely exposed to organic solvents classified as carcinogenic and mutagenic substances. Objective: To characterize the population susceptibility and evaluate the genotoxic effects of exposure to organic solvents. Methods: A cross-sectional study comparing a group of car painters exposed to organic solvents with a non-exposed group. CYP2E1 polymorphisms and the presence of micronuclei in lymphocytes were determined. Results: One hundred twenty-two workers participated in the study: 62 who worked in car paint shops and were exposed to solvents, and 60 who were not exposed. There were statistically significant differences between the two groups regarding micronucleated cells and nucleoplasmic bridges frequencies (p=0.042 and p=0.046, respectively; exact likelihood ratio). Significant differences were found at the interaction between the CYP2E1 genotype c1c1 and occupational exposure to solvents, with higher frequencies of micronuclei (p= 0.013) and micronucleated cells (p= 0.015). However, when the frequencies of micronuclei, micronucleated cells and nucleoplasmic bridges in the exposure group were compared between the c1c1 and c2c2/c1c2 allele groups of the CYP2E1 polymorphism, statistically significant differences were found. Conclusions: This study confirms that when workers with CYP2E1 polymorphisms, specifically the c1c1 genotype, are exposed to organic solvents, they are more likely to have somatic cell mutations, a condition associated with increased susceptibility to diseases such as cancer

Resumen Introducción: Los pintores de vehículos automotores están rutinariamente expuestos a agentes como los solventes orgánicos, capaces de producir efectos mutágenos y carcinógenos. Objetivo: Caracterizar la susceptibilidad poblacional y evaluar los efectos genotóxicos debidos a la exposición a solventes orgánicos. Métodos: Estudio de corte transversal que comparó a un grupo de pintores de carros expuestos a solven tes orgánicos con un grupo de personas no expuestas. Fueron determinados tanto los polimorfismos de CYP2E1 como la presencia de micronúcleos en linfocitos. Resultados: Participaron 122 personas, 62 trabajadores de talleres de pintura de autos expuestos a solventes y 60 personas no expuestas. Con relación al cuestionario Q 16, 32% de los expuestos refirieron síntomas sugestivos de neurotoxicidad. Las frecuencias de células micronucleadas y de puentes nucleoplásmicos fueron significativamente mayores en los expuestos que en los no expuestos: p= 0.042 y p= 0.046, respectivamente, Razón de verosimilitud exacta). Fueron halladas diferencias significativas en la interacción de CYP2E1 (c1c1) y la exposición ocupacional a solventes, con mayores frecuencias de micronúcleos (p= 0.013) y de células micronucleadas (p= 0.015). Conclusiones: Este estudio reafirma que los trabajadores expuestos a solventes orgánicos con polimorfismos de CYP2E1, específicamente con genotipo c1c1, tienen mayor probabilidad de presentar mutaciones en las células somáticas, condición asociada con una mayor susceptibilidad a enfermedades como el cáncer

Asociación entre tabaquismo y recuento de micronucleos en células de epitelio bucal de estudiantes de una universidad privada, Ica - Perú (2017) / Association between tobacco use and micronuclei count in buccal epithelium cells from students of a private college, Ica, Peru (2017)

Objetivo. Evaluar la asociación entre el recuento de micronúcleos en células de epitelio bucal y tabaquismo en estudiantes de pregrado de una universidad privada en Ica. Materiales y métodos. Estudio transversal realizado en estudiantes de quienes se obtuvieron células de epitelio bucal y las cuales fueron teñidas con Giemsa para realizar el conteo de micronúcleos en 2000 células por cada muestra, utilizando microscopia de luz visible a un aumento de 100 X. El tabaquismo se valoró por auto reporte y en escala nominal dicotómica (si o no), recolectándose datos sobre la frecuencia y tiempo de consumo de cigarrillos. Resultados. Se evaluaron 129 estudiantes, en los que el 58.1% fueron mujeres y un promedio de edad de 24.9 ± 5.4 años. El 25.6% eran fumadores activos, cuyo recuento promedio de micronúcleos fue de 3.9 ± 2.4, mientras que en los no fumadores de 0.5 ± 1.2. Se encontró una relación directamente proporcional entre presentar tabaquismo y el recuento de micronúcleos (p<0.001). La edad, sexo, número de cigarrillos consumidos y tiempo como fumador no generaron diferencias significativas en el recuento de micronúcleos. Se observó que los estudiantes con tabaquismo presentaron 9.7 veces el riesgo (IC 95%: 4.4 - 21.6) de tener más de 2 micronúcleos/2000 células, ajustado por edad y sexo. Conclusión. El tabaquismo está asociado al recuento de micronúcleos en células de epitelio bucal de estudiantes de una universidad privada en Ica, Perú.

Objective. To assess the relationship between micronuclei count in buccal epithelium cells and tobacco use in students from a private college in Ica. Materials and Methods. This is a cross-sectional study that was performed in college students. Samples from their buccal epithelium were obtained, and they were stained with Giemsa aiming to perform micronuclei count in 2000 cells per sample, using light microscopy at 100 X. Tobacco use was obtained by self-reporting and using a nominal dichotomic scale (yes/no), and data were collected with respect to frequency and time consuming cigarettes. Results: One hundred and twenty nine students participated, 58.1% were female and their average age was 24.9 ± 5.4 years. One quarter of all participants (25.6%) were active smokers, and their average micronuclei count was 3.9 ± 2.4, while the count in non-smokers was 0.5 ± 1.2. A directly proportional relationship was found between tobacco use and micronuclei count (p<0.001). Age, sex, number of cigarettes per day and time being a smoker did not generate significant differences in micronuclei counts. It was found that students with marked tobacco use had a 9.7 times (95% CI: 4.4-21.6) higher risk for having more than 2 micronuclei/2000 cells, being this adjusted for age and sex. Conclusion. Tobacco use is associated to micronuclei count in buccal epithelial cells from students in a private college in Ica.

Citometría de flujo en reticulocitos de sangre periférica como indicador de inestabilidad cromosómica en pacientes con gliomas de alto grado / Flow cytometry in peripheral blood reticulocytes as a marker of chromosome instability in highgrade glioma patients

Resumen Introducción. La cuantificación de la inestabilidad cromosómica es un parámetro importante para evaluar la genotoxicidad y la radiosensibilidad. Las técnicas convencionales requieren cultivos celulares o laboriosos análisis microscópicos de cromosomas o núcleos. La citometría de flujo en reticulocitos ha surgido como una alternativa para los estudios in vivo, ya que reduce los tiempos de análisis e incrementa hasta en 20 veces el número de células analizables. Objetivos. Estandarizar los parámetros de citometría de flujo requeridos para seleccionar y cuantificar reticulocitos micronucleados (RET-MN) a partir de muestras de sangre periférica, y cuantificar la frecuencia de esta subpoblación anormal como medida de inestabilidad citogenética en sendas poblaciones de voluntarios sanos (n=25) y pacientes (n=25) recién diagnosticados con gliomas de alto grado antes de iniciar el tratamiento. Materiales y métodos. Las células sanguíneas se marcaron con anti-CD71-PE para reticulocitos, anti- CD61-FITC para la exclusión de plaquetas y yoduro de propidio para detectar el ADN en reticulocitos. La fracción celular MN-RETCD71+ se seleccionó y se cuantificó con un citómetro de flujo automático. Resultados. Se describió detalladamente la estandarización de los parámetros citométricos, con énfasis en la selección y la cuantificación de la subpoblación celular MN-RETCD71+. Se establecieron los niveles basales de MN-RETCD71+ en la población de control y en los pacientes se encontró un incremento de 5,2 veces antes de iniciar el tratamiento (p<0,05). Conclusión. Los resultados evidenciaron la utilidad de la citometría de flujo acoplada a la marcación de las células RETCD71+ como método eficiente para cuantificar la inestabilidad cromosómica in vivo. Se sugieren posibles razones del incremento de micronúcleos en células RETCD71+ de pacientes con gliomas.

Abstract Introduction: The quantification of chromosomal instability is an important parameter to assess genotoxicity and radiosensitivity. Most conventional techniques require cell cultures or laborious microscopic analyses of chromosomes or nuclei. However, a flow cytometry that selects the reticulocytes has been developed as an alternative for in vivo studies, which expedites the analytical procedures and increases up to 20 times the number of target cells to be analyzed. Objectives: To standardize the flow cytometry parameters for selecting and quantifying the micronucleated reticulocytesCD71+ (MN-RET) from freshly drawn peripheral blood and to quantify the frequency of this abnormal cell subpopulation as a measure of cytogenetic instability in populations of healthy volunteers (n =25), and patients (n=25), recently diagnosed with high-grade gliomas before the onset of treatment. Materials and methods: Blood cells were methanol-fixed and labeled with anti-CD-71-PE for reticulocytes, antiCD-61-FITC for platelet exclusion, and propidium iodide for DNA detection in reticulocytes. The MN-RETCD71+ cell fraction was selected and quantified with an automatic flow cytometer. Results: The standardization of cytometry parameters was described in detail, emphasizing the selection and quantification of the MN-RETCD71+ cellular fraction. The micronuclei basal level was established in healthy controls. In patients, a 5.2-fold increase before the onset of treatment was observed (p <0.05). Conclusion: The data showed the usefulness of flow cytometry coupled with anti-CD-71-PE and anti- CD-61-FITC labeling in circulating reticulocytes as an efficient and high resolution method to quantify chromosome instability in vivo. Finally, possible reasons for the higher average of micronuclei in RETCD71+ cells from untreated high-grade glioma patients were discussed.

Daño genotóxico en trabajadores de minería artesanal expuestos al mercurio / Genotoxic damage among artisanal and small-scale mining workers exposed to mercury

Objetivos. Determinar el daño genotóxico en trabajadores de una minería artesanal expuestos a mercurio. Materiales y métodos. Estudio observacional de corte transversal, en el cual se evaluaron trabajadores expuestos a mercurio (n=83), de quienes se colectaron células por hisopado bucal para su posterior tinción, revisión microscópica y recuento de micronúcleos y otras alteraciones nucleares. También se colectó orina de 24 h para la determinación de mercurio inorgánico. Resultados. El 68,7% de las personas estudiadas fueron de sexo masculino, la media de edad fue de 43 ± 12,4 años (rango: 16-76). El tiempo promedio de exposición ocupacional a mercurio fue de 12,1 ± 6,7 años, y el contacto con mercurio fue de 4,1 ± 3,6 kg por persona por día. El 93% de los evaluados no utilizaban equipos de protección personal durante la manipulación del mercurio. Los resultados del monitoreo biológico evidenciaron que el 17% de los evaluados presentaron concentraciones de mercurio en orina mayor a los 2,5 µg/L; siendo este valor el límite de detección de la técnica de medición utilizada. Los resultados de la evaluación genotóxica evidenciaron que el 15% de las personas con exposición laboral a mercurio presentaron micronúcleos en células de epitelio bucal; hallándose otros indicadores de alteración nuclear como los puentes nucleoplásmicos, gemaciones y binucleaciones, que también son considerados como eventos genotóxicos asociados a la exposición por agentes de riesgo físico o químico. Conclusiones. El hallazgo de micronúcleos en células del epitelio bucal reflejan daño genotóxico asociado a la exposición laboral por mercurio utilizado en las actividades de minería artesanal.

Objectives. To determine the genotoxic damage among artisanal and small-scale mining workers exposed to mercury. Materials and methods. Observational cross-sectional study which evaluated mercury-exposed workers (n=83), whose cells were collected by mouth swab for further staining, microscopic observance, micronuclei count, and other nuclear alterations. 24-hour urine was also collected for the determination of inorganic mercury. Results. 68.7% of participants were male, the mean age being 43 ± 12,4 years (range: 16-76). The average time of occupational exposure to mercury was 12,1 ± 6,7 years, and the contact with mercury was 4,1 ± 3,6 kg per person per day. 93% of participants failed to wear personal protection gear while handling mercury. Results of biological monitoring showed that 17% of participants had concentrations of mercury in urine higher than 2,5 µg/L, this value being the detection limit of the measurement technique used. Results of the genotoxic evaluation evidenced that 15% of people with labor exposure to mercury presented micronuclei in mouth epithelial cells, and other indicators of nuclear alteration such as nucleoplasmic bridges, gemmation and binucleation were found, which are also considered genotoxic events associated to the exposure of physical or chemical risk agents. Conclusions. The finding of micronuclei in mouth epithelial cells reflects genotoxic damage associated to the labor exposure of mercury used in artisanal and small-scale mining activities.